Techniques d'immuno-localisation en microscopie optique chez les plantes

Anatomie végétale
La localisation in situ des protéines représente un enjeu important de la biologie végétale et ses applications sont multiples : de la recherche au diagnostic. En dépit de l’avènement des protéines fusion (Tag GFP, YFP, CFP…), la reconnaissance antigène – anticorps reste un outil de base pour la visualisation in situ des protéines.
© PHIV-Cirad

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Objectifs

  • Acquérir les bases théoriques et pratiques de la technique d’immunolocalisation sur coupes afin d’être capable de la mettre en œuvre.
  • Connaître les avantages et les limites des différentes techniques d’immunohistochimie, leur champ d’application et les modalités techniques en fonction du matériel à étudier

Public

Chercheurs, Enseignants, Techniciens, Ingénieurs.

Langue

Français

Programme

Jour 1

  • Accueil des participants
  • Présentation de la formation
  • Cours théorique : principe de l’immuno-histologie
  • Présentation et visite de la plate-forme PHIV avec les équipements en microscopie de la plateforme Montpellier Ressources Imagerie

Jour 2

  • Préparation du matériel végétal :
  • Coupes au vibratome (tissus frais) et au microtome (tissus inclus en paraffine).
  • Etape de blocage
  • Anticorps primaire (dirigé contre une protéine pariétale)
  • Discussion sur les différents protocoles et préparation du matériel végétal éventuellement apporté par les participants

Jour 3

  • Test de l’efficacité de l’étape de saturation des sites non-spécifiques
  • Anticorps secondaire
  • Révélation (par fluorescence et par activité enzymatique)
  • Observations en microscopie de fluorescence (champ plein et confocal) ou en lumière transmise

Jour 4

  • Suite de l’expérience sur matériel des participants
  • Observations en microscopie de fluorescence (champ plein et confocal) ou en lumière transmise

Jour 5

  • Initiation au traitement de l’image et à la déconvolution numérique
  • Discussion (nous insisterons sur la notion de témoin et sur les critères de validation des résultats)
  • Bilan de la formation
poster formation IHC2020 V3 pdf - 1045.16Ko

Intervenants

Cirad : Jean-Luc VERDEIL, Frédéric GATINEAU, Marc LARTAUD et Christine SANIER

INRA : Geneviève CONEJERO

Prérequis

Notions de base en biologie végétale et anatomie

Matériel pédagogique

Modalités pédagogiques

  • Cours théoriques et pratiques
  • Expériences et observations

Modalités d’évaluation

  •  Evaluation des acquis: exercices, manipulation, quiz, etc
  • Questionnaire de satisfaction en fin de formation

Voir aussi